★ 服务简介

Cas9蛋白的CDS长达4kb，克隆难度和包毒难度都相对大，将Cas9基因高效导入细胞是应用Cas9/CRISPR系统进行基因敲除的难点之一，极大地限制可供选择的将基因导入细胞的方法。并且在用CRISPR/Cas9系统进行基因敲除时，还需要同时转入识别靶点的gRNA，筛选阳性细胞的抗性基因或荧光基因，用同源重组法进行基因敲除，还需要导入同源重组模板。如此多的基因共同表达，很难得到较高的基因编辑效率，造成后续的阳性克隆筛选和检测工作难度大。

汉尹生物独创性研发出慢病毒Cas9表达体系。该体系采用慢病毒体系先在细胞中稳定表达Cas9蛋白，构建稳定表达Cas9蛋白的细胞系，再在该细胞系的基础上导入gRNA和基因敲除实验中用到的其它原件。该体系采用慢病毒体系先在细胞中稳定表达Cas9蛋白，构建稳定表达Cas9蛋白的细胞系，再在该细胞系的基础上导入gRNA和基因敲除实验中用到的其它原件用于特异性基因敲除。

★ 服务描述

CRISPR/Cas9是一种最新的靶向基因敲除技术，能够强有力的作用于基因组的分子生物学工具。该技术现已证明能够在多种哺乳动物细胞，植物细胞，酵母中进行靶向基因敲除和定点编辑。传统的CRISPR/Cas9系统需要分别转录出tracrRNA（trans-activating RNA）和crRNA (CRISPR RNA)，然后这两者通过碱基配对形成tracrRNA:crRNA二元复合体指导Cas9蛋白剪切特定位点的双链DNA（图1）。我公司采用新型的单链引导RNA(single guide RNA,sgRNA)可以模拟tracrRNA:crRNA二元复合体,能够直接与Cas9核酸酶构建在同一质粒上，表达后指导基因组DNA的切割（图2）。

图1：传统的CRISPR/Cas9系统 图2：单质粒CRISPR/Cas9系统

★ 服务特点

1.适用于在同一个细胞系中需要进行多个基因敲除的实验；

2.基因敲除效率比直接质粒转染更高；

3.提供多种不同荧光和抗性标记的慢病毒表达载体，更易筛选到基因敲除成功细胞；

4.接受cas9蛋白稳定表达不同细胞系定制。

★ 服务内容
提供哺乳动物的Cas9质粒构建服务；
★ 汉尹优势
1：1个质粒即可完成基因敲除实验；
2：只需两周即可完成质粒构建；
3：可以同时针对靶基因的多个位点进行剪切；
★ 客户所得
1：符合客户要求的重组质粒（约2ug）和甘油菌（约200ul）；
2：完整的电子版实验报告（包括实验材料，步骤，载体图谱等）；
3：完整的测序报告；