PCR法支原体快速检测试剂盒

细胞培养是生命科学研究中常用的实验手段。细胞培养是一个动态的连续过程，细胞通常会对操作失误或污染物有所反应，这些反应往往表现出不正常的细胞状态或培养基外观。如果受到支原体污染时，细胞形态较之无明显变化，极易被忽视，往往直到污染非常严重时才能发现。受污染的细胞膜上可能有几百个支原体，这些支原体竞争营养并释放有毒的代谢产物，严重影响实验结果。

研究表明，至少二十多种支原体能污染细胞，其中最常见的有：口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginini）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）、发酵支原体（M. fermentans）人型支原体（M. hominis）、唾液支原体（M.salivarium）、肺支原体（M.pulmonis）和梨支原体（M.pirum）等。培养细胞的支原体污染率在4%-92%不等，其污染来源包括工作环境、操作者本身（一些支原体是人体的正常菌群）、培养基、血清、细胞交叉污染、实验器材和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。

确认细胞培养过程中出现问题的潜在原因是一项困难且耗时的任务，在细胞培养中，任何突然的变化都应该被怀疑，同时良好的试验规范和定期检测支原体污染也十分必要。支原体检测的方法有很多种，如直接培养、DNA荧光染色、ELISA和PCR法等。其中PCR法是较为理想的方法，它综合了几个优势：灵敏、特异、快速并且可以用直接用细胞培养上清液检测。本制品通过PCR方法检测培养细胞等生物材料中的支原体，所用引物为根据支原体16S-23S rRNA序列保守区域设计，只特异性扩增支原体DNA，检出灵敏度与特异性都很高。PCR扩增及电泳分析只需数个小时，操作方便简单。

本产品包含以下试剂：

注1：长期不用时，可-80℃冷冻保存。

注2：PCR反应极其灵敏，为防止假阳性，加样时，最后加阳性对照。

除本产品以外，还需准备以下试剂和仪器。

此PCR反应为巢式PCR，第一轮PCR结束后，取其反应产物为第二轮PCR模板。根据两轮PCR产物电泳条带之有无及片段大小来分析结果。贴壁细胞培养3-6天后，直接取其上清液进行PCR反应。

第一轮PCR：

充分融化引物及Myco -1 PCR Mix，按下列表格配制反应液。

1. 按下列条件进行PCR反应:

第二轮PCR：

附录：各种支原体扩增片段大小